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    以下便是土壤DNA提取试剂盒的原理与操作
    点击次数:68 发布时间:2022-05-28
     
      土壤的成分包括矿物质、粘土等无机物、植物及植物的体、腐殖物质等土壤有机物以及在土壤中存在的微生物。
      从土壤中提取的DNA,是微生物、动植物体等的总DNA,同时,腐殖物质的性质与DNA很相似,DNA提取过程中会将腐殖等物质一起纯化,采用传统的DNA提取方法来除去腐殖物质等抑制因子是十分困难的。而这些腐殖物质会抑制聚合酶链式反应(PCR)及限制性酶切等。因而,从土壤中提取DNA,腐殖物质等抑制因子的除去干净是重中之重。某公司根据腐殖物质等特点,发明了高效的腐殖酸吸附剂,再与硅胶柱纯化的技术结合,开发出了高效土壤DNA提取试剂盒(SoilDNAKit),已为广大客户所采用,完全能够替代价格昂贵的进口产品。
      土壤DNA提取试剂盒的原理与操作:
      土壤样品加入悬浮缓冲液BufferC1,并加入玻璃珠与利的腐殖酸吸附剂BufferC2,涡旋使土壤充分重悬,腐殖物质充分释放,让吸附剂有效吸附腐殖酸。再加入高效的裂解液BufferC3并涡旋在玻璃珠的摩擦作用下,裂解土壤中的所有生物包括G+细菌、酵母菌、真菌、藻类、线虫甚至真细菌的孢子、芽孢、动植物体等,游离DNA。之后,再加入沉淀剂BufferC4,离心沉淀除去土壤残渣、吸附有腐殖酸的吸附剂、多糖多酚、绝大部分的色素等,获得清亮的、含有DNA的上清,上清加入异丙醇沉淀获得DNA粗品。粗品中加入ddH2O溶解后,再加入BufferC5离心进一步除去腐殖酸等杂质,获得上清,往上清加入乙醇后转移到硅胶纯化柱中过柱吸附DNA,除去杂质。再加入漂洗液BufferWB离心进一步除去蛋白质、腐殖酸等杂质,加入漂洗液DNAWashBuffer除去盐分等。干燥柱子后加入灭菌去离子水后,离心获得高纯的DNA。
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